通過工程細胞(如細菌、酵母或哺乳動物、昆蟲或植物細胞系)重組技術生產的生物制品在其生產過程中,一些非產品的、宿主細胞來源的物質會不可避免地進入工藝中。這一過程將產生目標產物和宿主細胞來源的雜質,包括宿主細胞蛋白(HCPs)的混合物,以及其他與工藝相關的雜質。殘留HCPs有可能影響產品的質量、安全性和有效性。生物制品中HCPs的主要問題是其有誘導機體產生抗HCP抗體的可能性,這些抗體可能會引起患者產生臨床癥狀。此外,HCPs可能作為免疫佐劑,誘導產生抗藥抗體,影響藥物安全性或有效性。HCPs對產品本身的質量也有直接的影響。例如,有蛋白水解功能的HCPs,即使是極少量的HCPs,也能逐漸水解產品蛋白,減弱或消除產品的生物學效力,或者改變產品的穩定性。因此通過工藝純化使得終產品中的HCPs的殘留量盡可能低,并需要建立良好的方法來檢測HCPs的殘留量。
      目前生物制品中HCPs的常用檢測方法為免疫分析方法,此技術相對簡單,精度良好,方便設定控制范圍和建立技術規范。而HCPs免疫分析方法的設計和驗證涉及到許多獨特和重大的挑戰,原因在以下幾點:

?   可能存在的HCP種類繁多;

?   一般使用多克隆抗體來檢測;

?   缺乏準確匹配的定量標準品;

?   在某些情況下,樣品稀釋效應會產生相當大的影響;

?   檢測單一HCP的內在局限性。

由于HCPs免疫分析的復雜性,并且HCP檢測是工藝開發和產品質量控制的重要組成部分,需要仔細開發和表征HCP檢測所需的關鍵試劑:

●  制備抗HCPs抗體的免疫原

●  抗HCPs多克隆抗體

● HCPs標準品

① HCPs檢測服務

     ② 抗HCPs多克隆抗體表征

抗體對(捕獲和檢測)的質量通常評估以下兩方面:

  表明在給定的純化中獲得的一系列樣品(包括DS)含有的HCPs,抗體對其是特異的和靈敏的。

  表明標準品中的多種HCP可被識別(即,HCPs的覆蓋范圍是足夠的)。

因此,企業在采用商業化ELISA試劑盒或者是自己開發的ELISA試劑盒時,務必需要完成上述兩方面的評價工作。



2D SDS-PAGE/Western blot抗體覆蓋率分析案例

覆蓋率計算公式:



    ③ 客戶定制化HCPs ELISA試劑盒開發

             抗原/HCPs標準品的表征、制備和穩定性研究
             抗HCPs多抗的制備和表征
             ELISA試劑盒的生產
             HCPs ELISA試劑盒分析性能驗證
             方法學轉移



工藝特異性ELISA試劑盒定制開發案例

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